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January 18, 2022

酶(enzyme)是一种分子,可作为体内和体外发生的化学反应的催化剂。由酶催化的反应称为“酶促”反应。酶学是一门研究酶的结构和反应机理的经典学科。酶参与生物体从消化物质到吸收、分布、代谢、排泄的所有过程(ADME),是生物体改变和利用物质所不可缺少的。因此,酶是生化研究的一个主要领域,从早期就成为研究对象。最近的研究表明,一个新的伪酶分析领域已经发展起来,并且在进化过程中,一些酶执行生物催化剂的能力已经丧失,通常反映在氨基酸序列和异常的“伪催化”特性上。人们认识到它坏了。许多酶主要由生物体内产生的蛋白质组成。因此,在生物体内的生产和分布特性、受热和pH变性、失去活性(失活)等特性与其他蛋白质相同。如果将活体比作机构,那么核酸碱基序列所代表的基因组对应的是蓝图,而活体中的酶则对应于组装工具。由于酶的特性,例如优先物质(底物)起作用的性质(底物特异性)和仅推进所需反应的性质(反应选择性(也称为反应特异性)),它是维持生命所必需的。引起各种化学变化。自古以来,人类就以发酵的形式使用酶。如今,酶的用途不仅限于食品制造,还广泛应用于制造化工产品、改善日用品功能和医疗等领域。在医疗中,消化酶被用作消化酶制剂,它们通过检查根据疾病而增加或减少的酶量来进行诊断。酶与医学治疗密切相关,因为大多数药物通过调节酶的作用发挥作用。

角色

酶在生物体中的作用是吸收构成生命的有机和无机化合物并引起必要的化学反应。生命现象包括许多代谢途径,每个途径都由多步化学反应组成。在细胞中,各种各样的酶负责细胞中发生的各种化学反应。每种酶从外部吸收适合其形状的特定原料化合物(底物),催化带电的化学反应,并将产物释放到外部。然后,再次吸入底物进行下一步反应,连续生产目标物质。这里释放的产物在负责另一种化学反应的酶的作用下被代谢成另一种生物物质。通过重复这些酶的催化反应,进行必要物质的产生和不必要物质的分解,维持生命活动。在生物体内,基质和产品的容器不像化学工业的植物那样是分开的,而是各种物质作为一个整体存在。然而,如果各种化合物在产生生命现象的代谢途径中以无序的方式反应,生命活动就无法维持。因此,酶必须从活体内的物质中选择应该起作用的物质。此外,如果反应产生额外的物质,可能会对周围环境产生不利影响,因此必须确定与某种底物发生的反应。酶具有如此高的底物选择性和反应选择性,以便在生物体内有序地进行化学反应。此外,一些酶具有通过变构、抑制等控制来自环境的化学反应进程的机制。通过具有选择性和可控性,酶可以在需要时在坚固的细胞中选择必要的原材料,并仅生产所需的产品。通过这种方式,酶的作用是在比细胞更小的规模上系统地起作用。人类自史前时代就开始使用的发酵也是通过细胞内外发生的酶促反应进行的。

发现

发现的第一种酶是淀粉酶(淀粉酶),由 A. Payan 和 JF Persoz (Jean Francois Persoz) 于 1833 年生产。他们发现了麦芽的无细胞提取物对淀粉的糖化作用,并首次发现部分发酵过程是在没有生命(细胞)的情况下进行的。结尾的“-ase”是酶命名法的一部分,源自淀粉酶。 1836 年,T. Schwann 发现并命名了胃液中的蛋白水解酶胃蛋白酶。大约在这个时候,酶被分离出来并作为未知因子被发现,同时仍然从活体中提取。 “酶”这个词是希腊语“εν ζυμη”,在酵母中的意思。源自(en zymi),1876年由德国的Wilhelm Kühne命名。在 19 世纪,路易斯巴斯德表明生命不是自然发生的,并且在没有生命的情况下发酵(腐烂)也不会发生。因此,人们普遍认为“有机物的形成离不开生命的帮助”,而酶促作用只是可以脱离生命的化学反应(生化反应)之一,是划时代的发现。但是,酶只能从生物体中提取出来,而且和微生物一样,具有遇热失活的特性,是不是混入了酶或无形的生命(细胞)引起的现象?很难区分是否是造成问题的原因。因此,酶引起生化反应的想法并没有立即被接受。在当时的欧洲学术界,巴斯德等人否认酶的存在,与贾斯图斯·冯·李比希等人承认酶的存在,争论不断。最终,在 1896 年,爱德华·布赫纳 (Eduard Buchner) 用酵母的无细胞提取物实现了酒精发酵,完全否定了动画理论,承认了酶的存在。

键和键孔理论

如上所述,在 19 世纪后半叶,酶仍被认为是从生物体中提取的未知因子,但对酶特性的研究已取得进展。在研究早期,底物特异性和反应特异性被认为是酶的特征。1894 年德国的埃米尔·费舍尔 (Emil Fischer) 发表的钥匙和钥匙孔理论是这一概念模型的顶峰。这是一种概念性地表达酶的特性的理论,即底物的形状和酶的一部分的形状处于键和键孔的关系中,并且形状不同的物质不被催化。即使是现在,它作为酶的酶促反应过程的模型也足够有效。然而,Fisher 并没有科学地证明这个模型到底是什么。

发现酶的物质

1926年,詹姆斯·萨姆纳成功地结晶出剑豆脲酶,并首次发现了这种酶的物质。萨姆纳提出他发现的尿素酶是一种蛋白质,并附有实验结果,但当时萨姆纳在美国这个欠发达国家进行研究,所以酶本身是一种蛋白质这一事实是相当公认的。 '不。后来,由蛋白质组成的酶的存在被约翰·霍华德·诺斯罗普和温德尔·斯坦利证明,这种酶的物质是一种蛋白质被广泛接受。

酶与分子细胞生物学

20世纪下半叶,X射线衍射等生物分子的分离分析技术得到改进,将生物现象理解为分子结构引起的功能的分子生物学,将细胞内现象理解为细胞器官。建立细胞生物学是为了了解细胞的功能以及与之相关的生物分子的行为。这些学科进一步推进酶研究。也就是说,酶的功能和特性已经可以通过形成酶的酶和蛋白质的结构及其构象变化来解释。如果酶的功能是由蛋白质的结构引起的,那么可以认为具有适合某种酶的结构的酶可以表达作为酶的功能。事实上,1986 年,Thomas Cech 等人首次发现了一种除蛋白质外还具有酶促作用的物质(核酶)。今天,基于这种酶的结构和功能理论,设计和开发具有人工催化作用的超分子(人工酶)的研究也在进行中。

特性

由于酶负责生物体内代谢途径的各个生化反应,因此具有不同于有机化学中使用的所谓催化剂的底物特异性和反应特异性等功能特性。另外,由于酶是由蛋白质组成的,它与其他蛋白质一样具有失活的特性,即受热或pH值变性而失去活性的特性。接下来,将描述作为酶的共同特性的底物特异性、反应特异性和失活。

基质特异性

酶具有选择作用于物质的能力,其特性是底物特异性(英文:称为底物特异性)。例如,当让某种肽降解酶(肽酶)起作用来分解蛋白质时,特定位点的肽键被水解,从而使某些位点不作为底物而根本不起作用。另一方面,当蛋白质被酸碱催化剂(而不是酶)水解时,它会作用于肽键的任何部分。另外,肽降解酶只与肽键反应,不作用于其他键(酯键或糖苷键),但如果是酸/碱催化剂,则无区别地分解肽键和其他键。这种特性从酶研究的一开始就被认识到,并通过一个比喻为钥匙和钥匙孔的模型来解释。 20世纪中叶以来,通过X射线晶体学鉴定酶分子的三维结构已经成为可能,锁孔机制的线索也已成为可能。即作为酶的蛋白质的三维结构具有大小不一、形状各异的凹痕,这些凹痕是根据蛋白质的一级序列(氨基酸的序列顺序)确定的。上面提到的锁孔只是蛋白质三维结构的一个凹陷(工艺)。该酶通过仅将适合凹陷的底物引导至存在于凹陷背面的酶的活性中心来发挥酶促作用。如今,即使三维结构不是通过X射线晶体分析确定的,也可以根据蛋白质的一级序列信息和作为​​设计图的基因的碱基序列信息来预测三维结构。过去的知识和计算机化学。它正在成为可能。此外,可以设计生物界不存在的蛋白质酶,或者用蛋白质以外的物质通过同样的方法设计人工酶。通过研究与生物界存在的酶相容的底物,可以制造出各种酶的抑制剂。也就是说,它试图通过设计一种物质来抑制酶的功能,该物质与酶的活性位点的结合比原始底物更强。设计酶和抑制剂的能力有助于发展药物和分子生物学研究。特异性)。例如,当让某种肽降解酶(肽酶)起作用来分解蛋白质时,特定位点的肽键被水解,从而使某些位点不作为底物而根本不起作用。另一方面,当蛋白质被酸碱催化剂(而不是酶)水解时,它会作用于肽键的任何部分。另外,肽降解酶只与肽键反应,不作用于其他键(酯键或糖苷键),但如果是酸/碱催化剂,则无区别地分解肽键和其他键。这种特性从酶研究的一开始就被认识到,并通过一个比喻为钥匙和钥匙孔的模型来解释。 20世纪中叶以来,通过X射线晶体学鉴定酶分子的三维结构已经成为可能,锁孔机制的线索也已成为可能。即作为酶的蛋白质的三维结构具有大小不一、形状各异的凹痕,这些凹痕是根据蛋白质的一级序列(氨基酸的序列顺序)确定的。上面提到的锁孔只是蛋白质三维结构的一个凹陷(工艺)。该酶通过仅将适合凹陷的底物引导至存在于凹陷背面的酶的活性中心来发挥酶促作用。如今,即使三维结构不是通过X射线晶体分析确定的,也可以根据蛋白质的一级序列信息和作为​​设计图的基因的碱基序列信息来预测三维结构。过去的知识和计算机化学。它正在成为可能。此外,可以设计生物界不存在的蛋白质酶,或者用蛋白质以外的物质通过同样的方法设计人工酶。通过研究与生物界存在的酶相容的底物,可以制造出各种酶的抑制剂。也就是说,它试图通过设计一种物质来抑制酶的功能,该物质与酶的活性位点的结合比原始底物更强。设计酶和抑制剂的能力有助于发展药物和分子生物学研究。特异性)。例如,当让某种肽降解酶(肽酶)起作用来分解蛋白质时,特定位点的肽键被水解,从而使某些位点不作为底物而根本不起作用。另一方面,当蛋白质被酸碱催化剂(而不是酶)水解时,它会作用于肽键的任何部分。另外,肽降解酶只与肽键反应,不作用于其他键(酯键或糖苷键),但如果是酸/碱催化剂,则无区别地分解肽键和其他键。这种特性从酶研究的一开始就被认识到,并通过一个比喻为钥匙和钥匙孔的模型来解释。 20世纪中叶以来,通过X射线晶体学鉴定酶分子的三维结构已经成为可能,锁孔机制的线索也已成为可能。即作为酶的蛋白质的三维结构具有大小不一、形状各异的凹痕,这些凹痕是根据蛋白质的一级序列(氨基酸的序列顺序)确定的。上面提到的锁孔只是蛋白质三维结构的一个凹陷(工艺)。该酶通过仅将适合凹陷的底物引导至存在于凹陷背面的酶的活性中心来发挥酶促作用。如今,即使三维结构不是通过X射线晶体分析确定的,也可以根据蛋白质的一级序列信息和作为​​设计图的基因的碱基序列信息来预测三维结构。过去的知识和计算机化学。它正在成为可能。此外,可以设计生物界不存在的蛋白质酶,或者用蛋白质以外的物质通过同样的方法设计人工酶。通过研究与生物界存在的酶相容的底物,可以制造出各种酶的抑制剂。也就是说,它试图通过设计一种物质来抑制酶的功能,该物质与酶的活性位点的结合比原始底物更强。设计酶和抑制剂的能力有助于发展药物和分子生物学研究。

诱导配合

人们认为与底物结合的酶比非结合酶具有更少的熵,事实上,与底物结合的酶对任何压力(如热或 pH 值的变化)都有抵抗力。通常会增加稳定性。认为这是因为酶的三维结构发生了变化。即,认为当底物结合时,酶变成适合催化反应的形状。然后,根据酶的三维结构的变化,底物的三维结构也发生变化,移动到过渡态。然后,认为通过随着熵的减小将反应过程向过渡态推进,从而降低了反应的活化能。引起这些可诱导化学反应的想法称为诱导拟合。诱导拟合对于底物特性的表达也很重要,但也与酶活性的表达和通过变构效应等对酶活性的控制有关。

反应特异性

即使我们专注于生物体内的一种底物,如果作用于它的酶不同,产物也会发生变化。通常,酶具有仅催化一种化学反应的特性,称为酶的反应专一性。由于酶的反应特异性,除了消化酶等少数例外,一种酶通常只负责体内复杂的代谢途径之一。这是持续维持生命体的重要属性。首先,某种代谢途径的存在取决于负责该代谢途径的独特酶的存在,因此可以通过产生酶蛋白的基因的表达来控制。此外,当其中一种代谢产物过量时,负责代谢途径的独特酶的活性就会发生反馈抑制,从而动态控制过量产生。酶负责其自身的底物和生化反应,但同一体内不同类型的组织和细胞可能对同一底物负责相同的生化反应。具有这种关系的酶称为同工酶(英语:isozymes)。

酶促作用的失活

构成酶的蛋白质的构象与酶的作用或其活性丧失的原因密切相关。导致失活的已知因素包括热、pH、盐浓度、溶剂和其他酶的作用。蛋白质根据热、pH、盐浓度和溶剂等条件很容易改变其三维结构,但当条件发生显着变化时,三维结构会发生不可逆的变化,在酶的情况下可能会失活...... 因此,酶促反应的条件是有限的,例如最适温度、最适pH和水性溶剂。在某些情况下,受污染微生物产生的消化酶(如肽酶)会导致蛋白质结构丢失和失活。然而,由于生物多样性极其广泛,那些据说能够承受极端温度和pH值的,例如嗜热菌、嗜酸细菌和碱性细菌所具有的酶(极端酶),以及能够承受极端温度和pH值的那些。有机溶剂保持其活性,这些酶的工业应用开始变得实用。

分类

酶的分类方法有多种,但这里我们将重点介绍基于酶的位置进行分类和基于底物类型和酶反应(底物特异性和反应特异性之间的区别)的系统分类。后一种分类与酶命名法有关。

按位置分类

可以毫不夸张地说,酶会引起生物体中的所有反应。因此,它普遍存在于参与代谢反应的生物体中。酶分为与生物膜(细胞膜和细胞器膜)结合的膜酶和存在于细胞质和细胞外的可溶性酶。在可溶性酶中,细胞外分泌的酶特别称为分泌酶。这种酶类型的差异类似于酶以外的蛋白质类型(膜蛋白、分泌蛋白)的差异,以及三者中疏水侧链和亲水侧链在一级结构上的分布。维结构(蛋白质)。这取决于排列基序的差异)。与其他蛋白质一样,酶是在细胞内核糖体中生物合成的,但它们的结构反映了酶的进化,因为它们的氨基酸序列是基因依赖性的。遗传上相邻的酶具有相似的基序并形成酶组。

膜酶

生物膜中存在的许多膜酶都参与能量储存和物质转运,并且有许多重要的酶组(ATP酶、ATP合酶、呼吸链复合物、细菌视紫红质等)在生物膜功能中发挥作用。根据生物膜与酶的位置关系,大致可分为三种。埋入型-埋在生物膜中的类型(受体蛋白等) 渗透型-穿透生物膜的类型(通道、转运蛋白、ATP合酶等) 粘附型-部分酶粘附在生物膜上类型的膜(氢化酶等)在内部是疏水的,在外部是亲水的(=称为脂质双膜),作为膜酶的蛋白质的部分结构(侧链)的特性也是膜与膜接触的部分是高度疏水的,对膜脂有极高的亲和力,而从膜中突出的部分是高度亲水的。

可溶性酶

存在于细胞质中的酶相对较好地溶于水。许多这些可溶性酶参与细胞质中的代谢。可溶性酶通常具有球形的三维结构,外侧为亲水性氨基酸,内侧为疏水性氨基酸。

分泌型酵素

酶在细胞内产生,但有些酶产生后分泌到细胞外,称为分泌酶。消化酶是一个典型的例子,分泌出来的酶很容易吸收细胞外存在的物质。它的形状通常像可溶性酶一样呈球形。当生物体受到某种刺激(热、pH、压力等的变化)时,可能会观察到一种称为胞吐作用的现象,其中分泌酶以分泌形式释放。在结构生物学的进展中,许多最早结晶并确定三维结构的酶都是分泌酶。

系统的分类

根据反应特异性和底物特异性之间的差异对酶进行分类可以进行系统分类。有一个 EC 编号作为表示这种系统分类的符号。EC编号由“EC”后面的四个数字“EC XXXX”(X是一个数字)表示,从数字的左到右分类越来越细。在EC数中,反应专一性首先定义为氧化还原反应、转移反应、水解反应、解离反应、异构化反应、ATP辅助合成、离子和分子跨生物膜转运,共七种。它被分为几组。EC 1.XXX — 氧化还原酶 EC 2.XXX — 转移酶 EC 3.XXX — 水解酶 EC 4.XXX — Liase EC 5.XXX — 分离酶 EC 6.XXX — Rigase EC 7.XXX — ABC 转运 虽然分类标准不同对于每一组,它根据反应特异性和底物特异性之间的差异进行细分。该EC编号分配给所有酶,目前已发现约3,000种反应。此外,负责一种活性的酶往往具有其他活性,ATPase等除ATP水解反应外还具有蛋白质水解反应活性(EC数、氧化水解酶、转移酶)、水解酶、裂解酶、异构化酶、连接酶等)。

命名法

该酶的名称由国际生物化学联合会酶委员会给出,同时给出一个EC编号。在酶的名称中添加了“平凡名称”和“系统名称”。下面举例说明通用名和系统名的区别。(例)以下酶为同一种酶(EC编号=EC 1.1.1.1) 菌株名称——酒精:NAD+氧化还原酶(氧化还原酶) 底物分子名称(多酶情况)和反应名称被链接。被命名。系统名称中对反应名称有限制。俗名——乙醇脱氢酶(dehydrogenase) 按照与菌株名称相同的规则命名,只是省略了部分底物而缩写。此外,还有很多酶不遵循命名约定,DNA聚合酶就是其中之一。古代发现并命名的酶,按当时的名称,不按上述规则使用。这些包括胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶和过氧化氢酶。

作品

除 RNA 外,酶由蛋白质组成,但在某些情况下,它们仅由蛋白质组成,而在其他情况下,它们包含非蛋白质成分(辅因子)(复杂蛋白质)。当酶是复杂蛋白质时,除非与辅因子结合,否则不会表达其活性。此时,未与辅酶结合的蛋白质称为脱辅基酶,将脱辅基酶和辅酶结合的酶称为全酶。在下文中,除非另有说明,不包含金属的蛋白质以外的有机化合物简称为有机化合物。辅因子的例子包括无机离子、有机化合物(辅酶)和含金属的有机化合物。已知一些维生素是辅酶。辅因子按其与酶结合的强度分类,但界限不明确。此外,构成酶的蛋白质链(肽链)可以是多条线或多种类型。当由多条肽链组成时,每条具有三维结构的肽链称为亚基。

补欠分子族

具有强键或共价键的辅因子称为辅基。辅基可能是有机化合物,但可以从酶中释放的辅因子称为辅酶,以区别于辅基。存在于过氧化氢酶和 P450 活性中心的血红素铁是典型的假体组。它也可以直接与蛋白质结合,例如金属蛋白酶锌离子。生物体所需的微量金属元素通常作为辅基结合到酶中。

补酵素

有机化合物的辅因子称为辅酶。当它没有被释放时,它被称为假肢组。还有一种想法是将与脱辅基酶具有弱键合的有机化合物的辅基用作辅酶,将辅酶视为辅基的一种。然而,辅酶或辅基的标准并不严格,例如,即使与酶共价结合也能释放的硫辛酸与辅酶相区别。辅酶并不总是结合到酶的结构中,而是需要在酶促反应发生时与底物共存。它在酶活跃时被吸收并产生全酶。因此,随着酶促反应的进行,它与底物一起被消耗,这与典型的辅基不同。虽然酶蛋白会因热而变性和失活,但辅酶具有较高的耐热性,并且可以通过透析与酶蛋白分离,因此它们作为辅助因子的存在很早就被人们知道了。1931 年,奥托·海因里希 (Otto Heinrich) 首次发现辅酶。许多维生素或维生素的代谢物用作辅酶。典型的辅酶有NAD、NADP、FMN、FAD、硫胺素二磷酸、磷酸吡哆醛、辅酶A、α-硫辛酸、叶酸等,其中很多被用作保健食品中的补充剂。

亚基和同工酶

酶可以由多个肽链(蛋白质链)组成。在这种情况下,每条肽链都有自己的三级结构(三维结构),称为亚基。亚基组成有时称为酶的四级结构。例如,人体内的乳酸脱氢酶(LDH;EC 1.1.1.27)是由四个亚基组成的四聚体,但众所周知,亚基组成因身体组织的位置而异。在这种情况下,有两种亚基,心肌型(H)和骨骼肌型(M),其中任意四种结合形成乳酸脱氢酶(如H2和M2组成的H2M2等)。因此,乳酸脱氢酶有五种类型,它们与负责在同一底物上进行相同生化反应的同工酶有关。通过应用这一点,例如,可以在临床试验中鉴定(可通过电泳鉴定)乳酸脱氢酶的同工酶类型,以鉴定疾病是肝炎还是心肌病。需要注意的是,这里显示的因素以外的因素(例如由于基因突变导致的一级结构变化)可能会导致同工酶。

复合酶

负责一系列代谢过程的多种酶通常形成簇以形成复杂的酶。作为典型的例子,显示了脂肪酸合成复合酶。它们是 [ACP] S-乙酰转移酶 (AT; EC 2.3.1.38)、丙二酰转移酶 (MT; E, C.2.3.1.39)、3-氧酰基-ACP 合酶 I (KS)、3-氧酰基-ACP 还原酶(六酶,KR;EC 1.1.1.100)、巴豆酰 ACP 水合酶 (DH;EC 4.2.1.58) 和烯酰 ACP 还原酶 (ER;EC 1.3.1.10),与酰基载体蛋白 (ACP) 形成簇。酶。大多数脂肪酸合成系统是复杂的酶,唯一的单一酶是乙酰辅酶 A 羧化酶 (TE; EC 6.4.1.2)。

生物化学

酶动力学

日本工业标准中定义为“酶是一种生物高分子物质,其主要成分是具有选择性催化作用的蛋白质”(JIS K 3600:2000-1418),用作催化剂,但化学工业的反应特性不同于上述使用的典型金属催化剂。首先,在酶促反应的情况下,观察到随着底物浓度[S]增加反应速率饱和的现象。在酶的情况下,当底物浓度变化很大时,反应速率绘制一条双曲线,导致最大饱和速率 Vmax。另一方面,在金属催化剂的情况下,初始反应速率[v]由底物浓度[S]的线性方程决定,而与催化剂浓度无关。这可以通过酶和金属催化剂之间颗粒状态的差异来解释。在金属催化剂的情况下,催化剂颗粒的表面被金属原子覆盖,催化剂位点数不胜数。另一方面,在酶的情况下,酶分子往往比底物大,最多只有几个活性中心。因此,与金属催化剂相比,即使底物与催化剂(酶)发生碰撞,反应频率(适合活性中心)也较低。当底物浓度增加时,底物与少量酶的活性中心竞争,从而出现饱和现象。这样,在酶促反应中,认为酶与底物结合形成底物复合物的过程是决定反应速率的定速过程。

酶反应的配方

1913年,L. Michaelis和M. Menten测量了蔗糖的酶促水解反应,从“钥匙和钥匙孔”模型和实验结果推导出酶促底物复合模型,并制定了酶促反应。根据该模型,酶如下所示。酶(E)+底物(S)⇄{\displaystyle\rightleftarrows}酶底物复合物(ES)→酶(E)+产物(P)即酶反应是酶和底物暂时发生反应的酶分为形成底物复合物的第一过程和将酶底物复合物分离成酶和产物的第二过程。碳酸酐酶是一种分子活性极高的酶,每秒可将100万个二氧化碳转化为碳酸根离子(kcat 106 s-1)。

抑制模式和酶动力学

酶的反应速率受到与底物结构相似的分子的存在和下述变构效应的影响(抑制)。酶反应速率的响应模式(抑制模式)根据抑制作用的类型而变化。因此,通过分析反应速率和反应速率参数并检查抑制模式,可以识别正在接收什么样的抑制作用。通过研究它是一种什么样的抑制模式,就可以推断出该酶正在经历什么样的调节作用。在药物开发中,研究调节作用已被应用于通过控制酶促作用来改善症状的新治疗剂的开发。抑制模式可以大致分类如下。竞争性抑制(competitive Inhibition) 非竞争性抑制 非拮抗性抑制 非竞争性抑制 混合抑制

酶反应活化能

一般来说,化学反应进行的方向是化学势降低的方向(消耗能量的方向),反应速度很大程度上取决于反应的活化能是否高(化学反应)。平衡或反应动力学)。酶促反应属于催化反应,属于化学反应的一种,因此它们的性质相似。但是,一般而言,在化学反应中,催化反应的活化能通常较低,但酶促反应的活化能在很多情况下特别低。一般当活性能量从15000cal/mol降低到10000cal/mol时,反应速率常数增加约4.5×107倍。

反应机理模型

对于酶反应产生与无机催化剂和酸碱催化剂不同的基本性质的机理,例如为什么表现出酶的底物特异性以及如何降低活化能等,目前尚无统一答案。可以说是得到了。然而,今天,通过使用结构生物学的发展和通过生产重组蛋白引入突变等技术,规模正在得到澄清。以蛋白水解酶丝氨酸蛋白酶为例,通过将底物与酶结合,降低反应体系的熵(熵阱)的作用形成酶复合物。结合的底物通过诱导拟合以适合反应的状态固定在活性中心,反应进行到产物。这里,显示了一种丝氨酸蛋白酶的糜蛋白酶的例子。His57 将质子转移到带负电的 Asp102。His57 成为一个基地并剥夺了活跃中心 Ser195 的质子。Ser195 被激活(带负电)以攻击底物。His57 将质子转移到底物 His57 剥夺 Asp102 的质子并返回到 1 的状态。

过渡态和抗体酶

在酶促反应中由酶底物复合物转变为产物的过程中,经历了一个过渡态或反应中间体,其中原子间的键距和角度变成了变形的分子结构。换句话说,容易发生化学反应的分子形状是一种过渡状态,酶通过诱导酶底物复合物的配合来创造这种状态。由于过渡态对应于具有高活性电位的状态,它克服了反应中间体的状态,转变为能量较小的产物。如果说创造过渡态是酶蛋白的主要作用,人们认为如果可以通过结合创造过渡态,它就会成为酶。抗体是一种生物物质,它实际上以与酶相同的方式识别分子结构并与分子结合。1986年,美国的Tramontano等人发现以与酶具有相同功能为目的而生产的抗体表现出预期的酶促作用,并将其命名为抗体酶(abzyme)。利用超分子化合物生产人工酶的研究也取得了成功。

酶促反应的调控机制

为了使生物体控制酶活性的大小,存在控制酶量的情况和改变酶性质的情况。它们分类如下。通过控制酶蛋白的合成量来增加酶量 酶蛋白与其他生物分子的可逆作用引起酶活性变化 酶蛋白修饰引起酶活性变化 1. 基因表达的调节 它是通过量的转录调控,2和3中酶的质变反应比1中的转录调控更快。“反馈抑制”是调节2和3的一个例子。当产物因反馈抑制而过量时,酶活性降低,当产物减少时,酶活性恢复。

酶的作用条件

大致可以分为以下四种。最佳 pH 最佳温度 底物浓度 酶浓度

最适pH

每种酶都有一个功能最活跃的pH值,这被称为最适pH值(英语:optimal pH)或最适pH值。大多数酶在每种环境的生理 pH 值下最活跃。例如,在人体内,最适pH值通常在7左右,但胃液中所含胃蛋白酶的最适pH值为1.5,胰蛋白酶的最适pH值约为8,精氨酸酶(en:Arginase)的最适pH值为9.5. 应该注意的是,最适 pH 值并不是最能稳定酶的 pH 值。

最适温度

与最适 pH 值一样,存在酶最活跃的温度。这也称为最佳温度或最佳温度。就人体酶而言,通常在生理温度35°C到40°C左右。应该注意的是,与最适 pH 值一样,最适温度并不是最能稳定酶的温度。

底物浓度

酶的功能取决于底物的浓度。基本上,反应速率随着底物浓度的增加而增加,但在一定浓度时达到饱和。此外,通过增加底物的浓度,可以显着抑制酶的功能。这些酶与底物浓度之间的关系因酶和底物的类型而异。

酶浓度

酶的功能还取决于酶本身的浓度。基本上,酶的浓度越高,反应速度越快。体内酶浓度受基因表达控制。在体外,虽然取决于酶的溶解度,但在大多数情况下,因浓度过高而沉淀的酶的结构被破坏,即使再次溶解也难以恢复其功能。

酶在现实生活中的各种情况下都有应用。一种是利用酶本身,食品加工业是一个典型的领域。另一个是观察和控制生物体内的酶,典型的领域是医疗/制药行业。

食品

自史前时代以来,人类就利用发酵来生产腌制食品。例如,味噌、酱油、清酒等发酵食品的生产,传统上使用的是酒曲和麦芽等生物。将大米或大麦加入籽曲,放置约40小时后,曲霉生长成为米曲或大麦曲,在这些曲中蓄积了各种酶、蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等。在发酵过程中,这些酶将食物中的蛋白质分解成肽和氨基酸使其变得美味,并将碳水化合物分解成糖类,乳酸菌和酵母可以利用它们使食物变甜,从而产生独特的风味。现在,由于酶的物质和功能的细节已经明确,甚至可以通过酶本身的作用来制造发酵食品,而无需使用生物体,通过使用酶可以如预期地改变食品的性质。有可能做到。在制造过程中,酶促反​​应用于市场上的许多加工食品,也用于生产由淀粉制成的各种糖。也可用于果汁的澄清、苦味的去除、肉的软化等品质改善,以及通过溶菌酶提高保质期等。发现的第一种酶淀粉酶是一种淀粉酶,用作消化剂。酶用于以下领域。糖生产α-淀粉酶――水糖果生产β-淀粉酶――格拉姆糖生产葡萄糖异构酶――高果糖玉米糖浆(果糖)生产葡萄糖淀粉酶――葡萄糖生产海藻糖生产酶和海藻糖游离酶――海藻糖生产肉类和乳制品加工 巴平 ――软化的肉凝乳酶 ――奶酪制造食品的改性谷氨酰胺酶 ――通过转化为 L-谷氨酸果胶酶来改善口感 ――清除果汁/果酒半纤维素酶 ――改性面包(淀粉和面筋之间的相互作用) ) 减少面包老化由于) 蛋清 Resoteam-提高储存稳定性 由于这些酶是生物来源的天然产品,因此在食品相关法律法规要求的原材料标签中经常省略它们。此外,在发酵食品以外的加工食品中,酶作为加工助剂使用,因此在制造过程中失活或去除,在成品食品中不存在。因此,这些酶的处理方式与食品添加剂不同。

崇尚健康食品的产品

胰酶常用于牛和猪的胰腺,糜蛋白酶和胰蛋白酶(牛),胰脂肪酶(猪)作为药物,菠萝蛋白酶(菠萝)和木瓜蛋白酶(木瓜蛋白酶)作为帮助蛋白质消化的保健食品。含有酶的消化酶制剂作为准药品和二类药品销售。Takamine Jokichi 的淀粉降解酶 Takadiastase 是从麦麸发酵和培养的,也是要混合的酶之一。有时医院会开消化酶制剂,目的是改善因体内缺乏消化酶而引起消化症状、血流和皮肤症状的状况。消化酶制剂在医学上使用,并且由于胰腺疾病导致的酶缺乏而有效。另一方面,在NIKKEI STYLE上发表的近畿大学农学部副教授Masahiko Ariji认为,这种效果没有科学依据,因为即使口服酶也会被消化。

日用品

如今,酶常用于为洗涤剂和化妆品等日用品增加高价值。例如,在洗涤的情况下,仅用肥皂就难以去除汗渍和食物污渍。与简单的油渍不同,它所含的蛋白质是固体,污渍成分与固体缠绕在一起,牢固地附着在衣物纤维上,因此仅用表面活性剂洗涤不能完全去除污渍。... 因此,广泛使用含有作为分解蛋白质的酶的蛋白酶的含酶洗涤剂。然而,由于普通蛋白酶在溶解肥皂的碱性区域不起作用,因此使用在碱性区域(具有最佳pH值)作用良好的碱性蛋白酶。碱性蛋白酶于 1947 年由 M. Ottesen 等人从嗜碱细菌中发现。碱性蛋白酶现已大量生产用于含酶洗涤剂,占工业产品生产的蛋白酶的 60% 以上。除了蛋白酶之外,一些洗涤剂还添加了纤维素酶来部分分解衣物的纤维素纤维,以利于污垢的扩散。举个类似的例子,在洗碗机中添加蛋白酶(蛋白质污渍)和脂肪酶(油渍)等酶可以增强去污能力,而添加淀粉酶(淀粉糊)只能流水。用自动洗碗机清洗。洗涤剂酶的安全性已得到充分研究,它们很容易并最终在环境中分解。将酶应用于化妆品的实例包括将分解角蛋白的木瓜蛋白酶(一种蛋白酶)添加到脱毛剂中以分解和切断从皮肤突出的废毛发。作为将该酶应用于牙膏的例子,有添加了分解牙菌斑中所含的葡聚糖的葡聚糖酶的产品。

医疗

20 世纪对酶的日益增长的知识带来了医学和治疗学的巨大改革。由于酶参与人体内发生的代谢,因此可以通过测量酶丰度的临床测试来诊断疾病(例如亚基和同工酶节点中的乳酸脱氢酶)。参见)。如果疾病的原因是酶调节<稳态>的障碍,则可以使用抑制酶活性的治疗剂(例如,高血压中的血管紧张素转换酶抑制剂,糖尿病中的肠促胰素降解酶)治疗症状。抑制疾病等)。相反,先天性代谢缺陷酶缺乏是已知的,但可以在发病前检测酶的量,并进行抑制发病的治疗(戈谢病)。

工业技术(固定化酶)

即使不包含在产品中,酶也被用于从食品工业到香料和医药原料等精细化工领域的各种食品原料和化工产品的生产。例如,作为在工业化学中使用从活体提取的酶的技术,酶固定化已经变得普遍。固定化是一种将工业酶固定在基质(载体)上的方法。为了经济地生产,必须有效地将产物从反应体系中除去,以免发生逆反应。然而,如果酶也同时被去除,原本是可回收/可重复使用的催化剂的酶就变成了一次性的。固定是解决这个问题的一种方法。今天,固定化酶被用作生物反应器技术,用于生产各种化工产品,从食品工业到精细化学品领域,如香料和医药原料。生物反应器是一种用泵注入底物(原料)同时排出产物的生产装置,通过将酶与载体固定在柱状反应器中,连续生产存在酶回收和经济效益问题它解决了改进等问题。从红藻中分离出来的多糖κ-角叉菜胶(也用作食品和化妆品的胶凝剂)广泛用于生物反应器的酶或含酶微生物的固定化。世界上第一个使用固定化酶成功工业化的是千畑一郎、土佐哲也等人,1967年使用固定在DEAE-Sepadex载体上的氨酰化酶(EC 3.5.1.14)作为外消旋体。我们开发了一种获得光学活性氨基的方法通过从 N-酰基-DL-氨基酸的混合物中仅不对称水解所需的 L-氨基酸。

生物传感器

利用酶的底物特异性和反应性来检测化学物质的传感器已投入实际应用。这些被称为生物传感器是因为它们利用了生物学功能,自 1960 年代开始研究以来一直用于医疗诊断和环境测量,葡萄糖传感器于 1976 年在美国上市。使用酶的生物传感器特称为酶传感器。在结合电化学和酶化学的葡萄糖传感器中,葡萄糖氧化酶固定在电极上。当样品中存在葡萄糖并且葡萄糖氧化酶起作用时,电流通过氧化还原反应流过电极,可以对葡萄糖进行定量。这种葡萄糖传感器用于糖尿病患者用来检查自己的血糖水平的市售血糖仪。此外,正在研究将酶与荧光发射、晶体振荡器和表面等离子体共振等原理相结合的生物传感器。

生命起源与酵素

在所有现存物种中,所有蛋白质(包括酶)的蓝图都基于基因组,即 DNA 的遗传信息。另一方面,DNA自身的复制和合成也需要酶。换句话说,酶的存在是以DNA的存在为前提的,而DNA的存在是以酶的存在为前提的,所以在起源上存在先建立DNA还是先建立酶的悖论。基因组。在那里。最近的研究将这个悖论描述如下,尽管它仍然未经证实。由 Thomas Cech 等人于 1986 年在美国发现的核酶是一种催化性 RNA,已知可催化以下三种类型的反应。它作用于自身来切割 RNA。 (组 I、II、III 内含子的自剪接)作用于其他 RNA 以切割 RNA。 (Rivonuclease P)肽键形成。 (核糖体23S rRNA) 从特征1和特征2,认为RNA具有自我复制阶段。另外,从性质3可以看出,RNA也可能起到酶的作用。由此看来,虽然是假说,但在目前的基因组表达机制(称为中心法则)建立之前,存在着一个叫做RNA世界的阶段,在这个阶段,同一个RNA扮演着基因和酶的角色,相信已经完成了。另外,特征3。作为例子给出的 23S rRNA 存在于合成大肠杆菌蛋白质的核糖体中。在大肠杆菌的核糖体中,重新排列氨基酸并将氨基酸与氨酰-tRNA 合成的肽结合的酶的主要活性中心是 23S rRNA,而不是蛋白质。此外,已经发现这种情况下的酶促作用(肽基转移酶活性)取决于 23S rRNA 的结构域 V。此外,已发现铅离子参与核酶的自裂解。这表明 RNA 也可能与蛋白质酶的辅助因子具有共同的机制。根据RNA世界理论,持有基因组的作用被归类为DNA,酶的功能被归类为蛋白质,认为RNA世界已经演变成今天的中心法则。在那个阶段,推测以下RNA特征促成了进化因素。 RNA 具有不利的特性,假设基因库是 RNA 而不是 DNA。核糖2'位存在羟基的性质,通过酯交换形成环状核苷(环状AMP等),使核苷酸容易被切断。另一方面,DNA 不形成环状磷酸酯,因为它在核糖 2' 位缺少羟基,并且形成比 RNA 更稳定的核苷酸。而且,当考虑到三维结构的多样性时,已经发现RNA的三维结构具有比蛋白质更简单的高阶结构。因此,与由RNA组成的酶相比,由蛋白质组成的酶具有更多的三维结构变化,认为该酶在形成底物特异性和过渡态模型方面具有更好的性能。由于它在该位置缺少羟基,因此不会形成环状磷酸酯,而是形成比 RNA 更稳定的核苷酸。而且,当考虑到三维结构的多样性时,已经发现RNA的三维结构具有比蛋白质更简单的高阶结构。因此,与由RNA组成的酶相比,由蛋白质组成的酶具有更多的三维结构变化,认为该酶在形成底物特异性和过渡态模型方面具有更好的性能。由于它在该位置缺少羟基,因此不会形成环状磷酸酯,而是形成比 RNA 更稳定的核苷酸。而且,当考虑到三维结构的多样性时,已经发现RNA的三维结构具有比蛋白质更简单的高阶结构。因此,与由RNA组成的酶相比,由蛋白质组成的酶具有更多的三维结构变化,认为该酶在形成底物特异性和过渡态模型方面具有更好的性能。由于存在该位置的羟基,通过酯交换形成环状核苷(环状AMP等),核苷酸容易断裂。另一方面,DNA 不形成环状磷酸酯,因为它在核糖 2' 位缺少羟基,并且形成比 RNA 更稳定的核苷酸。而且,当考虑到三维结构的多样性时,已经发现RNA的三维结构具有比蛋白质更简单的高阶结构。因此,与由RNA组成的酶相比,由蛋白质组成的酶具有更多的三维结构变化,认为该酶在形成底物特异性和过渡态模型方面具有更好的性能。由于存在该位置的羟基,通过酯交换形成环状核苷(环状AMP等),核苷酸容易断裂。另一方面,DNA 不形成环状磷酸酯,因为它在核糖 2' 位缺少羟基,并且形成比 RNA 更稳定的核苷酸。而且,当考虑到三维结构的多样性时,已经发现RNA的三维结构具有比蛋白质更简单的高阶结构。因此,与由RNA组成的酶相比,由蛋白质组成的酶具有更多的三维结构变化,认为该酶在形成底物特异性和过渡态模型方面具有更好的性能。

人工酵素

由于发现分子结构参与分子识别和过渡态的形成,人们尝试通过改变酶的结构来制造人工酶(人工酶)。作为接近方法,有改变酶蛋白设计的方法和设计超分子化合物的方法。前者自 1980 年代以来一直在尝试,并且已经对酶的特性如何通过突变氨基酸序列进行了反复试验研究。比较不同生物之间的基因组已经成为可能,并且很清楚来自不同生物的同一酶的哪些部分具有高共性,哪些部分没有,因此在此基础上改变了序列(所谓的生物技术)。技术作为技术的一部分)。 1990年代以来,计算机的速度显着提高,数据量增加,通过计算机模拟从一级序列设计蛋白质的三维结构并预测其物理性质成为可能,而无需测量实际蛋白质。正在制作。 2000年代,在各种生物物种中完成了基因组的完整解码,并尝试从遗传信息(生物信息学技术)解决分子生物学问题。目前,应用正在从生物信息学信息发展到阐明蛋白质功能的蛋白质组学技术。 2008 年,报道了一种由计算科学设计的酶,它实际上充当了 Kemp 消除的催化剂。关于后一种超分子化合物的设计方法,在 1980 年代左右开始研究进行分子识别的超分子化合物(即模拟底物特异性的化合物)。最初,无法识别底物结构的细节,因此我们从确定分子的体积开始。然而,从早期阶段开始,通过静电相互作用与其他分子结合的包合物(环糊精、冠醚等)是已知的。因此,作为第一种人工酶,具有环状结构的环糊精通过侧链结构进行修饰,模拟活性中心,形成中心空腔。已设计的化学品仅与成瘾化合物发生反应。今天,当分子被识别时会发出荧光的超分子化合物也被设计出来。此外,在活性中心产生过渡态的方法被系统化为反应场理论。 2001 年诺贝尔化学奖获得者 Ryoji Noyori 和 Barry Sharpless 将反应场理论的一项应用成功用作不对称催化剂。

典型酶列表

显示了典型酶的列表。参与消化、同化、分解代谢和能量代谢的酶 Proteas(蛋白水解酶)胃蛋白酶、胰蛋白酶——蛋白质消化酶木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶——食物来源的消化酶凝血酶——凝血酶脂质降解酶脂肪酶——中性脂肪消化脂蛋白脂肪酶——身体脂质转运氧化酶(加氧酶)单加氧酶细胞色素 P450-药物降解酶过氧化物酶过氧化氢酶-与过氧化氢(活性氧的产物之一)的分解能量代谢相关的酶 ATP 合酶-呼吸链 ATP-产生核酮糖 1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶<RubisCO>——碳酸固定<光合作用>参与遗传的酶DNA聚合酶——DNA复制/修复RNA聚合酶——转录为m-RNA,基因表达核酸酶——DNA/m-RNA编辑,核酸代谢限制酶- 基因工程。氨酰 tRNA 合成 – 参与 t-RNA 合成细胞中信号转导和分子修饰的酶 磷酸酶(激酶) – 信号脱磷酸酶(磷酸酶) – 设计糖基转移酶 – 糖链修饰的 DNA 甲基化酶 – 控制基因表达

酶的年表

19 世纪 1833 法国的 Anselm Payan 和 Jean-Francois Perso 从麦芽提取物中分离出一种将淀粉分解成单糖(葡萄糖)的物质。他们将这种物质命名为“淀粉酶”(现在在法语中意为“酶”)。 1836年,德国的Theodor Schwann发现胃液具有溶解动物肉的作用,并从胃液中分离出病原体。这种物质被命名为“胃蛋白酶”。这证明类似的活动不仅存在于植物中,也存在于动物中。 1857年,法国的路易斯巴斯德宣布酒精发酵过程基于微生物(酵母研究)活动。然而,巴斯德并没有证明这是由一种叫做酶的无生命物体引起的。然而,德国的 Justus von Liebig 否认了这一理论,称细胞外无生命因子(当时使用术语“发酵”)参与发酵而不是微生物。 1873年,瑞典的Jöns Jacobellius提出了“化学反应靠催化进行”的概念(因为这个概念被认为是一种酶)。 1878 年德国的 Wilhelm Kühne 内部的酵母(希腊语中的“酶”)(希腊语中的“en”)) 针对发酵的发生提出了“酶”的概念。 1894年,德国的Emil Fischer发表了酶与底物的“Key and Keyhole Theory”,解释了酶的底物特异性。 1894年日本的Jokichi Takamine发现了Takamine淀粉酶。 1897 德国的 Eduard Buchner 证明酵母提取物可以进行酒精发酵。 20世纪1902年英国的Ferdinand Brown和法国的Henry Louis Le Chatelier观察到sculase的活性受酶浓度的调节,在反应过程中,底物与酶形成酶底物复合物。反应动力学)。 1907 爱德华·布赫纳因上述成就获得诺贝尔化学奖。 1913 Michaelis、Menten 和其他人宣布“Michaelis-Menten Ceremony”以回应 Brown 和 Le Chatelier 的结果。 1925 GE Briggs 和 JBS Holden 发表了“Briggs-Holden 动力学”,这是 Michaelis-Menten 公式的发展。 1926年,美国的詹姆斯·萨姆纳从剑豆中结晶出一种叫做“脲酶”的酶,发现酶的主体是一种蛋白质(虽然当时没有对这个实验进行评估)。 1930 美国约翰霍华德诺斯罗普提取胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶作为蛋白质晶体。 1931 德国的 Otto Heinrich 因发现呼吸酶的特性和作用机制而获得诺贝尔生理学或医学奖。 1945年,美国的George Wells Beadle和Edward Tatum宣布一种基因对应一种酶(一种基因,一种酶理论)。 1946 年,萨姆纳和诺斯罗普因证明酶的主体是一种蛋白质而获得诺贝尔化学奖。 1955 年 Sanger 等人确定了胰岛素的一级结构。 1955年瑞典的 Hugo Theorell 因其对氧化酶的研究而获得诺贝尔生理学或医学奖。 1960年,美国的William Stein和Stanford Moore确定了核糖核酸酶的氨基酸序列。 1962 约翰·肯德鲁和马克斯·佩鲁茨因球状蛋白质的结构研究而获得诺贝尔化学奖。 1965年,英国的大卫菲利普斯揭示了溶菌酶和底物复合物的三维结构(这是第一次将三维结构确定为酶)。 1965 法国的弗朗索瓦·雅各布、安德烈·米歇尔·勒沃夫和雅克·莫诺因在酶和病毒合成的遗传调控方面的工作而获得诺贝尔生理学或医学奖。 1965 Yoshiyuki Takasaki 等人发明了一种利用葡萄糖异构酶生产异构化糖的方法。 1968 年霍斯史密斯,KWWilcox 等人发现了一种 DNA 限制酶。 1968 年美国人 Joe McCord 和 Irwin Fridovich 发现了超氧化物歧化酶 (SOD),这是一种消除自由基的酶。 1969年,美国的Robert Bruce Merrifield采用肽固相合成法化学合成脂肪核酸酶。 1972 Stein 和 Moore 因确定酶的一级结构而获得诺贝尔化学奖。 1975 年澳大利亚的约翰康福斯因其对酶催化的立体化学研究而获得诺贝尔化学奖。 1978 年,美国的 Daniel Nathans、Hamilton Smith 和瑞士的 Werner Arber 因发现限制酶并将其应用于分子遗传学而获得诺贝尔生理学或医学奖。 1986 年,美国的 Thomas Cech 等人发现了“核酶”,一种催化性 RNA。这创造了催化不依赖于蛋白质的概念。此外,生命起源是“RNA世界假说”的基础,它始于RNA。 1986年,美国的Tramontano等人发现了一种抗体酶(abzyme)。 1989年,Check等人因发现核酶而获得诺贝尔化学奖。 1992 年,瑞士的 Edmond Fischer 和美国的 Edwin Krepes 因发现可逆蛋白磷酸化作为生物调控机制(蛋白激酶)而获得诺贝尔生理学或医学奖。 1997年美国的Paul Boyer和英国的John E. Walker阐明了三磷酸腺苷(ATP)(ATP合酶)合成背后的酶机制,丹麦的Jens Christian Skou是离子转运酶。获得诺贝尔化学奖首次发现 Na +, K + -ATPase 奖。因首次发现 K + -ATPase 获得诺贝尔化学奖。因首次发现 K + -ATPase 获得诺贝尔化学奖。

脚注

注解

来源

相关项目

EC编号 消化酶 酶反应 连接酶异构化糖酶 反应动力学 低食品(生食)

外部链接

“酵素”-Kotobank